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CRISPR介导的MPK11基因敲除及其功能研究

更新时间:2019-01-19
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CRISPR介导的MPK11基因敲除及其功能研究

摘  要

CRISPR(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) /Cas    (CRISPR-Associated)是最近几年来快速发展的一种基因编辑技术,是一种由RNA指导Cas核酸酶对靶向基因进行特定DNA修饰的技术。通过设计可以与目的基因配对的单链gRNA(guide RNA),使其引导Cas核酸酶蛋白在配对位点处进行切割,导致双链DNA断裂,从而利用生物体内的非同源末端修复机制(NHEJ)或同源重组机制(HR)修复DNA,导致目的的基因的替换、删除或移码突变,致使目的基因的功能丧失,进而可以对其功能进行研究。
促分裂原活化的蛋白激酶(MAPK)信号途径,包括MAPKKK、MAPKK和MAPK三级蛋白激酶,三者通过磷酸化逐级传递并放大刺激信号,参与调控细胞生长、发育、分化、凋亡等多种生理过程。而对MAPK基因的研究主要集中在MPK3、MPK4和MPK6,对其他基因研究较少。本文以模式植物拟南芥为材料,通过CRISPR/Cas9基因编辑系统,敲除拟南芥促分裂原活化的蛋白激酶编码基因MPK11,通过对敲除的突变体进行功能研究,以阐明MAPK级联信号在生长发育中的作用。

关键词:基因编辑;MAPK级联信号;拟南芥;突变体