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| 抗人PD-L1单克隆抗体表达的研究 摘要 抗体药物具有均一的性质、较高特异性和针对特定靶点的定向制备等优势，在肿瘤免疫治疗中具有较好的临床价值。随着生物技术的发展，人源化抗体因其减少了机体的免疫排斥反应，延长体内半衰期等优点，成为抗体药物的研究重点。 程序性死亡受体1（PD-1）与其配体-1（PD-L1）结合，可以使肿瘤细胞逃避免疫抑制，近年来，阻断其途径成为肿瘤治疗的新方向。PD-1/PD-L1抗体药物被证实在多种肿瘤治疗中有很好的效果。 本课题组在前期的工作中完成了鼠源抗PD-L1抗体的人源化改造，获得具有活性的抗PD-L1抗体，并建立了检测方法。 在前期工作的基础上，首先通过HEK 293贴壁细胞瞬时表达抗PD-L1抗体，并优化其表达条件，表达量为0.561 μg/mL。由于整体表达量偏低不适合大量生产。本研究重新选择适合抗PD-L1抗体表达的宿主细胞HEK293 6E，构建抗PD-L1抗体表达载体使其更适应抗体在HEK293 6E大量表达，对表达条件进行检测。结果显示，成功构建以pTT5为载体的重链（pTT5-H），以pTT5为载体的轻链（pTT5-L），并在共转染细胞培养上清中有目的蛋白表达。通过筛选，发现Free StyleTMF17和A类无血清生长液更适合作为HEK293 6E细胞的生长培养基（P=0.01~0.049)。选择A类培养基作为表达培养基，其抗体蛋白在第5天表达量最高为63.02 μg/mL，明显高于1 d组（P<0.001）。检测发现，当DNA与PEI 的质量比为1:1时抗体在第4天表达量最高为170.9 μg/mL。当补料为5% OPM-293CD Feed时，第6天抗PD-L1抗体表达量最高为159.8 μg/mL。经SDS鉴定抗体重链分子量约为50 kD，轻链分子量约为25 kD，纯度为90%，浓缩后抗PD-L1抗体浓度为3 mg/mL。对抗PD-L1抗体进行活性检测，发现表达抗PD-L1抗体活性良好，可以在后续抗体研究中满足需求。结果证明，本研究成功建立了操作便利的抗PD-L1抗体表达体系。 |
